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众所周知，miRNA成为分子生物学研究热点，人类miRNA充当癌基因或抑癌基因的作用调控其靶基因的表达及相关信号通路，在肿瘤的发生、发展和转归过程中发挥重要作用[1，2]。miRNA参与个体发育、造血、脂肪代谢、器官生成以及细胞的增殖、分化、凋亡等活动，绝大多数癌基因或抑癌基因受到miRNAs分子的调控[3-6]。本文采用MTT技术探讨miR-34a在骨肉瘤中生物学功能和分子机制，为进一步阐明成骨肉瘤发生发展的分子机制提供理论依据。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1细胞株人成骨肉瘤MG-63细胞购自上海细胞生物学研究所。
1.1.2试剂MTT为Sigma产品，购自北京鼎国生物技术有限公司；miR-34amimics与inhibitors购自上海吉玛生物技术有限公司；脂质体Lipo2000购自Invitrogen公司。
1.2实验方法
1.2.1细胞培养MG-63细胞用DMEM培养基常规培养，取对数生长期细胞用于实验。
1.2.2MTT比色法为检测miR-34a对MG-63细胞生长增殖的影响，设计好实验组与对照组，每组设计重复孔3个，分别在转染各时间点后每孔加入配置好的MTT溶液20μL，37℃培养4h后倒掉培养基，每孔加150μL二甲亚砜，静置或轻摇10min，然后检测各孔的吸光度值。
1.2.3细胞转染消化传代待细胞增长到70%～80%左右。准备好2.5μL的脂质体Lipo2000与100μL无血清MEM培养基充分混匀，然后静置15～20min，分别用PBS与无血清MEM培养基洗涤细胞；一起加入96孔板中，然后按说明书操作。 |
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