【摘要】目的 研究不同中医治法对帕金森病（PD）大鼠内皮素（ET）、6?酮前列腺素F1α（6?keto?PGF1α）和血栓素B2（TXB2）的影响。方法 采用经典的6?羟基多巴胺损毁注射法制作PD 模型，并应用活血化瘀（代表方桃红四物汤）、涤痰熄风（代表方涤痰汤）、滋阴熄风（代表方天麻钩藤饮）和复合治法（代表方复方地黄方）等不同方剂进行治疗，同时设立正常对照组、假手术组作对照。放射免疫法测定大鼠血液ET、6?keto?PGF1α和TXB2的含量。结果 模型组TXB2、ET明显升高、6?keto?PGF1α明显降低，与正常对照组和假手术组相比差异均有统计学意义（P＜0.01）。与模型组相比，各药物治疗组ET差异均具有统计学意义（P＜0.01）；天麻钩藤饮组、复方地黄方组的三个指标差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。天麻钩藤饮组和复方地黄方组分别与桃红四物汤组比较，TXB2和6?keto?PGF1α差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；天麻钩藤饮组和复方地黄方组分别与涤痰汤组比较，各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）；天麻钩藤饮组和复方地黄方组比较，各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 各种治法均有明显的使PD大鼠血液血管活性物质TXB2、ET和6?keto?PGF1α的部分或全部指标向正常水平恢复的作用，但以天麻钩藤饮为代表的滋阴熄风治法和以复方地黄方为代表的复合治法为好。

　　【关键词】 不同中医治法；6?羟基多巴胺；帕金森病；6?酮前列腺素F1α；血栓素B2；内皮素

 

　　　　6?酮前列腺素F1α（6?keto?PGF1α）、血栓素B2（TXB2）和内皮素（ET）都属于血管活性物质，其在血浆中的含量及是否处于平衡状态对于心脑血管疾病的发生与否具有重要的意义。帕金森病（PD）属于中医学“颤证”、“震振”、“震掉”等范畴。多数学者认为PD的病因病机主要归纳为“虚”、“风”、“瘀”、“痰”等4个方面；治法也集中在滋补肝肾、平肝熄风、活血化瘀、蠲痰散结等治法的应用上，应用较多的中药方剂主要有天麻钩藤汤、定振丸、桃红四物汤、涤痰汤、温胆汤等。本实验旨在研究不同中医治法对PD大鼠血管活性物质6?keto?PGF1α、TXB2和ET水平的影响。

　　1  材料与方法

　　1.1  动物

　　SD大鼠SPF级，雄性，体重180～200 g，共87只，由上海中医药大学实验动物中心提供。实验入选42只。

　　1.2  药物

　　天麻钩藤饮（浓度5.13 g/ml）、桃红四物汤（浓度2.48 g/ml）、涤痰汤（浓度1.98 g/ml），剂量均依据许济群主编《方剂学》；复方地黄方（含熟地黄、白芍、珍珠母、丹参、全蝎等，浓度4.14 g/ml）(上海雷允上药材有限公司代加工)。

　　1.3  试剂、试剂盒 发表论文代理

　　6?羟基多巴胺（6?OHDA）、抗坏血酸（Ascorbic Acid）、阿扑吗啡（APO），美国Sigma公司产品。ET放射免疫分析药盒、6?keto?PGF1α放射免疫分析药盒、血浆TXB2放射免疫分析药盒，北京市福瑞生物工程公司产品，试剂盒批号：2007年11月。

　　1.4  主要仪器

　　大鼠脑立体定位仪：TOW?3A型，广东汕头市教育医学仪器厂；SN?682放射免疫γ计数器，中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂；旋涡混合器：XW?80A，上海医科大学仪器厂；分析天平：Sartorius anglytic，910324。

　　1.5  方法

　　1.5.1  PD大鼠模型制备

　　SD雄性大鼠，术前按常规进行行为测试，确认无异常旋转行为后，3%戊巴比妥钠（50 mg/kg）腹腔注射麻醉。然后将大鼠固定于脑立体定位仪上，酒精及碘酒常规消毒。沿正中线切开大鼠颅顶皮肤，剥离骨膜，暴露前后囟。纯过氧化氢擦拭颅骨表面，以前囟为准，根据包新民

　　等〔1〕大鼠脑立体定位图谱确定右侧黑质两个坐标：①前囟后5.2 mm，正中线右侧1.0 mm，硬膜下9.0 mm；②前囟后5.2 mm，正中线右侧2.5 mm，硬膜下8.5 mm。用牙科钻于手术要求部位小心钻开颅骨，用5 μl微量进样器将6?OHDA（溶于含0.02%抗坏血酸的生理盐水中，浓度为2 μg/μl）溶液注入右侧黑质部（以1.0 mm/min速度缓慢进针），每孔3 μl，注射速度为1 μl /min，注射完毕后留针5 min，然后以1.0 mm/min速度缓慢退针。手术完成后，用医用明胶海绵填塞颅骨孔，缝合切口皮肤，肌肉注射庆大霉素（20万U/只，共7 d），待动物清醒后放回笼中饲养。假手术组只注射含0.02%抗坏血酸的等量生理盐水，其余条件同造模组。正常对照组只固定大鼠，不行任何处理。造模手术 10 d后，腹腔注射APO 0.5 mg/kg诱发大鼠向健侧旋转，记录开始旋转至30 min内的旋转圈数，以平均旋转圈数每分钟超过7次者为合格PD模型〔2〕。

　　1.5.2  动物分组及给药方法 发表论文代理

　　将造模成功的30只PD模型大鼠随机分为PD模型组、桃红四物汤组、涤痰汤组、天麻钩藤饮组、复方地黄方组，每组6只；另纳入假手术大鼠和正常大鼠，每组6只，分别作为假手术组、正常对照组。其中PD模型组、假手术组和正常对照组大鼠灌饲生理盐水2 ml/d，桃红四物汤组、涤痰汤组、天麻钩藤饮组和复方地黄方组分别灌饲桃红四物汤、涤痰汤、天麻钩藤饮和复方地黄方2 ml/d，均灌饲45 d。

　　1.5.3  放射免疫检测

　　实验结束后进行行为学检测，然后腹主动脉取血，加入抗凝剂，4℃，3 000 r/min离心15 min，分离血浆，-20℃保存待测。按照放射免疫试剂盒说明书操作，进行ET、TXB2和6?keto?PGF1α的检测。

　　1.6  统计学方法

　　采用SPSS13.0版软件进行方差分析，所有资料均用x±s表示。2  结果

　　与正常对照组和假手术组相比，模型组TXB2、ET明显升高、 6?keto?PGF1α明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.01）。各药物组均能降低TXB2、ET，提高6?keto?PGF1α；与模型组相比，桃红四物汤组、涤痰汤组ET差异具有统计学意义（P＜0.01）；天麻钩藤饮组、复方地黄方组的 TXB2、ET、6?keto?PGF1α水平差异均具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。

　　涤痰汤组和桃红四物汤组相比，TXB2差异有统计学意义（P＜0.05）。天麻钩藤饮组和复方地黄方组与桃红四物汤组比较，TXB2和6?keto?PGF1α差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；与涤痰汤组比较，各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）；天麻钩藤饮组和复方地黄方组比较，各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。表1  6?keto?PGF1α、TXB2和ET检测结果(略)

　　3  讨论

　　通过挖掘中医学理论，旁及现代医家认识，并结合自己的临床实践，认为PD病因繁多，病机复杂，是一个多病因、多病机参与的难治病。其病理性质属本虚标实，本虚为肝肾亏损，脏腑功能失调；标实为风、瘀、痰、毒互结，蕴塞脑窍。故其治宜多法复方，综合调治，应滋补肝肾，平肝熄风，活血化痰，解毒散结诸法共用，任何仅用一法的治疗将失于偏颇〔3〕。复方地黄方便是依据以上述理论研制的治疗本病的中药复方。

　　发表论文代理

　　为了比较各种不同中医治法方药治疗PD的作用及其疗效，本实验在建立6?OHDA化学损毁法制作的PD大鼠模型的基础上，选择了活血化瘀（代表方桃红四物汤）、涤痰熄风（代表方涤痰汤）、滋阴熄风（代表方天麻钩藤饮）和复合治法（代表方复方地黄方）进行治疗，并检测6?keto?PGF1α、TXB2和 ET观察PD大鼠模型的证候疗效。结果表明，PD大鼠模型组血浆中TXB2、ET明显升高、6?keto?PGF1α明显降低，与正常对照组和假手术组相比差异分别具有统计学意义（P＜0.01）。与多数疾病的阴虚证、瘀血证和痰证患者ET和TXB2升高，阴虚证、瘀血证6?keto?PGF1α降低的特点一致。与模型组相比，四个药物组ET差异分别具有统计学意义（P＜0.01）。研究表明〔4〕PD患者血浆中ET含量显著升高。ET是由血管内皮、心肌、平滑肌等细胞合成及分泌的一种含有21个氨基酸的活性多肽，在正常生理状态下,血浆ET浓度极低，但在某些刺激因子作用下，如缺血、缺氧可以刺激前内皮素原的转录，促进释放。已证实在脑中存在ET受体，ET释放后与靶细胞上的受体结合，引起Ca2+内流，导致细胞内Ca2+浓度升高，引起神经细胞的死亡。天麻钩藤饮〔5〕可使阴虚阳亢型高血压病患者的血浆ET含量明显降低（P＜0.05）。因此认为以上四方可通过降低ET含量而治疗帕金森病。

　　与模型组相比，天麻钩藤饮组、复方地黄方组的 TXB2、6?keto?PGF1α差异也分别具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。天麻钩藤饮组和复方地黄方组比较，各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。以上结果说明，天麻钩藤饮和复方地黄方对改善中医证候相关的三个指标均有调整作用，且药效强于桃红四物汤和涤痰汤，并有统计学意义。 TXB2具有强烈促进血小板聚集和血管平滑肌收缩作用，6?keto?PGF1α为前

　　列环素(PGI2)的稳定代谢产物，具有抑制血小板聚集和舒张血管平滑肌的作用，这一对因子〔6〕的不平衡可以导致血管收缩痉挛，进一步引起脑低灌流量。相关研究〔7〕表明，慢性脑低灌流产生的切应力导致内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)上调，代偿性地使脑内微血管释放NO，以保持暂时的血流稳定；一段时间后，eNOS上调障碍，失代偿后，引起脑血流下降，血糖供应减少，ATP供应不足，氧化应激致使神经功能减退。桃红四物汤、涤痰汤、天麻钩藤饮和复方地黄方通过使血管活性物质6?keto?PGF1α、TXB2 和ET中的一个或全部向正常水平恢复的作用，缓解血管痉挛收缩状态，增加脑部血供抗氧化应激而起到治疗PD的作用。

　　天麻钩藤饮和复方地黄方两个复方，均具有滋补肝肾、平肝熄风之作用，都能够调节实验各项指标向正常水平恢复。虽然差异无统计学意义，但是复方地黄方的数据似乎更好一点，这可能与复方地黄方还具有活血化痰和解毒散结的功效有关，也与PD复杂的证候相兼的病理状态相符。详细机制有待进一步研究。

　　参考文献： 

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　　2 Carman LS,Fage FH，Shults CW.Partial lesion of the substantia nigra：relation between extent of lesion and rotational behavior〔J〕.Brian Res，1991；553（2）:275?83.

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　　4 严新翔,唐北沙.帕金森病血浆内皮素测定意义探讨〔J〕.现代康复,2001；5(6):81.

　　5 陈红霞,贾红娥.天麻钩藤饮对高血压患者一氧化氮、内皮素影响的研究〔J〕.中华现代中医学杂志,2006；2(2):111?2.

　　6 赵芝宝,冯为菊,龙宪和,等.急性脑梗死患者血浆血栓素B2和6?酮前列腺素与临床关系探讨〔J〕.江苏临床医学杂志，2000；4(6):475.

　　7 de la Torre JC，Pappas BA，Prevot V,et al.Hippocampal nitric oxide upregulation precedes memory loss and Aβ1?40 accumulation after chronic brain hypoperfusion in rats〔J〕.Neurol Res，2003；25(6):635?41