【摘要】　　目的 了解肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及纤维化指标(HA、PCIII IVC)在肝硬化肝功能损害中的临床意义。方法 采用放射免疫分析法测定了52例肝炎后肝硬化患者(观察组)和28例慢性肝炎(对照组)患者血清TNF-α和血清HA、PCIII IVC的变化。结果 观察组52例患者血清中TNF-α浓度明显增高，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；观察组HA、PCIII、IVC水平明显高于对照组 (P＜0.01)。TNF-α与Child-Pugh分级无关(P＞0.05)。结论 提示TNF-α、HA、PCIII IVC在肝硬化病程进展中起一定作用。

　　【关键词 】肝炎；肝硬化；肿瘤坏死因子；透明质酸；III型前胶原；IV型胶原

　　我国是病毒性肝炎的高发区，肝硬化发病率高，是我国常见疾病和主要死亡病因之一。肿瘤坏死因子(Tunmor Necrosis Factor，TNF)是20世纪80年代发现由巨噬细胞和单核细胞分泌的一种重要的细胞因子，是一类重要的促肝纤维化的细胞因子之一，具有免疫效应和炎症反应的双重作用，各种原因致慢性肝损伤时，可激活单核巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，本文用放射免疫法测定了52例肝炎后肝硬化患者血清 TNF-α和血清纤维化指标(HA、PCIII IVC)的变化，以了解TNF-α及HA、PCIII、IVC在肝硬化肝功能损害中的临床意义。

　　1  对象与方法

　　1.1  研究对象

　　我院2006年6—12月收治并确诊为病毒性肝炎、病毒性肝炎后肝硬化的住院病人共52例(观察组)，慢性肝炎患者28例作为本次研究的对照组。全部病例均排除肝占位性疾病、结缔组织病、血液系统病、慢性肾脏疾病、代谢性疾病、糖尿病等内分泌系统疾病以及其它炎性疾病。

　　1.2  仪器和试剂发表论文网

　　腹部B超(美国惠普公司Agilent IMAGEPOINT HX)，美国贝克曼全自动生化分析仪(CX-5)，快速血糖仪(美国强生)。γ-放射免疫自动分析仪(GC 1200安徽中佳光电公司生产)，可调微量加样器(芬兰，Finnpipette)，定时计(北京宣武区环境保护仪器厂生产)，SANYO MEDICA FREEZER-70℃反应管(浙江拱东医用塑料厂生产)。上海BECKMAN ALLEGRA TM21 R centrifuge(美国产，可调温度离心机)。γ-放射免疫计数器FJ-2003/50ARIACENTRIFUGE(国产，RIA数据处理器)。

　　1.3  肿瘤坏死因子放免药盒(TNF RIA Kit)购自北京市福瑞生物工程公司，批号20040701。HA、PCIII、IVC试剂由上海海军医学研究所提供，按说明书严格操作。

　　1.4  病例分组(共80例)

　　(1)观察组(52例)：1例酒精性肝硬化、病毒性肝炎后肝硬化病人51例，依据既往病史、体检、肝功能检查、腹部B超、各型肝炎病毒血清学指标、肝硬化五项指标及相关实验室检查，全部病人均符合2000年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准［1］。其中乙型肝炎病毒感染48例，丙型肝炎病毒感染 3例，腹水28例，有食管静脉曲张31例，消化道出血10例，肝昏迷4例。其中肝功能Child-Pugh score分极，分极标准包括血清总胆红素、血浆白蛋白、肝性脑病、腹水的程度、营养状况。A、B级35例、C级17例。性别分别为男36例，女16例，年龄11～72岁，平均(43±15)岁。无心、肺病史，心电图正常。(2)对照组：为慢性肝炎患者共28例。进行肝功能和超声波检查。男24例，女4 例。其中肝损伤轻度8例、中度10例、重度10例。年龄10～64岁，平均(38±9)岁。

　　1.5  血清标本的收集与检测

　　无菌抽取空腹静脉血2 mL，编号分装，注入不含抗凝剂普通试管中，离心后分离血清。置-30℃保存待测TNF-α。本实验采用平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按表操作。由自动 γ-计数器预先编制程序，直接给出有关参数。HA、PCIII、IVC按试剂盒中操作程序进行。

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　　1.6  统计学方法

　　数据以均数±标准差(±s)表示。二组间均数比较采用Student`s t检验，组间两两比较采用Student?Newman?Keuls。

　　2  结果

　　2．1  两组患者血清TNF-α、血清胆红素及肝功能的变化(表1)表1  两组患者血清TNF-α、血清胆红素及肝功能的变化(略)

　　观察组患者血清TNF-α和血清胆红素(SB)含量明显升高，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；谷丙转氨酶(ALT)两组变化差异无统计学意义。

　　2.2  对照组与观察组不同肝功能Child-pugh分级者血清TNF-α浓度变化(表2)表2  不同Child-pugh分级患者血清TNF-α的变化（略）

　　TNF-α含量观察组Child B、C明显高于对照组(P＜0.05或0.01)，而各级间差异无统计学意义(P＞0.05)。

　　2.3  两组患者血清肝硬化指标HA、PCIII、IVC的变化(表3)表3  血清TNF-α水平与患者血清纤维化标志物水平比较(略)

　　观察组HA、PCIII、IVC水平明显高于对照组(P＜0.01)。

　　3  讨论

　　慢性肝脏疾病是由多种不同病因引起的肝脏损伤。随着损伤后的修复，会伴随肝纤维化的产生，进一步则发展为肝硬化。随之而来的是肝硬化失代偿、肝功能不全甚至是肿瘤的发生，约25%病毒性肝炎最终发展为肝纤维化、肝硬化。TNF-α是一类重要的促肝纤维化细胞因子，具有免疫效应和炎症反应双重作用，主要由单核巨噬细胞(包括KC)产生，健康机体中含有生理水平的TNF-a，水平过高则损伤组织。陈乃玲等用原位杂交方法发现TNF-α在肝硬化病人的表达阳性率及表达程度与慢性肝病者相比明显增高［2］。郭继忠等［3］在四氯化碳制备的大鼠纤维化过程中，血清 TNF-α明显上升，在肝纤维化动物模型中，亦发现纤维化早期肝组织内出现TNF-α mRNA水平上升至纤维化期达峰值［4］。李德民等报道TNF-α在胆管结扎术和部分门静脉结扎术形成的2种门静脉高压大鼠模型中TNF-α血清浓度均升高［5］。本文肝硬化患者血清中TNF-α水平显著高于对照慢性肝炎组，与报道一致。本文观察的两组患者均有肝功谷丙转氨酶升高，但差异无统计学意义，表明两组患者肝组织损伤时，炎症程度无差异。TNF-α与肝损害密切相关，是由于各种原因致慢性肝损伤时，被激活的单核巨噬细胞分泌TNF-α及多种细胞因子，TNF-α与其他细胞因子共同作用并形成网络，对肝脏有明显的毒性，同时可引起肝细胞坏死。发表论文网

　　TNF-α与其他淋巴因子共同作用，参与慢性肝病的免疫过程。肝硬化时肝实质细胞数目减少，功能下降，内毒素清除作用降低，由于单核巨噬细胞系统对内毒素敏感性增加，即使无内毒素血症的发生，亦激活单核巨噬细胞系统释放TNF-α。体外研究也证实TNF-α能刺激星状细胞HSC增生进而促进胶原、蛋白聚糖合成［6］。正常肝脏，肝星状细胞处于静止期，静止期肝星状细胞可产生少量的Ⅲ、Ⅳ型胶原和细胞因子。肝损伤时由于细胞-基质间相互作用，激活肝星状细胞(HSC)过多的合成并分泌多种间质胶原，纤维化时，可增加3～4倍［7］。肝硬化患者肝功能失代偿，细胞因子廓清作用减弱，最终导致TNF-α水平明显升高［8］。血清肝纤维化五项指标被用于临床诊断肝纤维化已经数年，各个标志物检测的准确性、特异性不尽一致，血清透明质酸的诊断敏感度最好［9］。在肝纤维化过程中，肝实质细胞和间质细胞合成增加，引起肝内和血液中透明质酸含量升高，加之肝纤维化时，门体侧枝循环形成，部分透明质酸不流经肝脏导致其血清中浓度增高。肝纤维化时，肝损害累计内皮细胞功能，肝窦内皮细胞清除减少。本文结果显示观察组52例患者血清中HA、PCIII、IVC与对照组患者比较明显增高。故HA、PCIII、IVC可反映胶原的生成及纤维化程度。临床通过检测上述指标，可间接了解肝纤维化情况。

 

　　参考文献： 

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　　［2］李德民，王天才，赵秋.TNF-α和IL-6在两种门静脉高压大鼠模型中的变化［J］.华中科技大学学报，2002，31(5)：525-526.

　　［3］郭继忠，占强，唐建英，等.肝硬化患者血浆浆钙素基因相关肽及肿瘤坏死因子-α水平的变化［J］.中华消化杂志，2000，20(3)：203-204.

　　［4］Berman B，Wietzerbin J，Sanceau J.Pentoxifylline Inhibits cer-tain constitutive and Tumor necrosis factor-a-induced activities of human normal dermal fibroblasts［J］.J Invest Dermatol，1992，5(5)：705.

　　［5］陈乃玲，邓涛，白玲.慢性肝病肝组织凋亡蛋白TNF-α、TNF、BcL-2家族表达的研究［J］.临床肝胆杂志，2002，18(6)：112-113.

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　　［6］陈岳祥，黄裕新，王庆莉，等.抗TNF-a单抗对免疫性大鼠的纤维化影响［M］.中华消化杂志，1997，17(6)：358.

　　［7］周永新.现代肝硬化诊断治疗学［M］.北京：人民军医出版社，2002：2487-2489.

　　［8］David R，Nelson，Herbert L，et al.Activation of Tumor Necrosis Factor-a system in chronic Hepatitic C virus infection［J］.Digestive Diseases and Sciences，1997，42：375.

　　［9］李东，王法印.血清基质金属蛋白酶类检测的临床应用［J］.国外医学生物化学与检验学分册，2002，23(2)：100-110.